bmdm最新视觉报道_bmdm提取步骤(2024年11月全程跟踪)
젍1/M2巨噬细胞摄取检测法 젦检测M1和M2型巨噬细胞对特定化合物的摄取量吗?这里有两种刺激方法供你参考! ꠥ﹤1型巨噬细胞,首先取培养好的BMDM细胞,用PBS清洗后,加入含LPS(200 ng/ml)的培养基刺激6小时。之后加入待测化合物和阳性药,作用半小时后,通过一系列操作,最后用LC-MS进样检测。 𑠥﹤2型巨噬细胞,步骤类似。先取细胞,用PBS清洗,然后加入含IL-4和IL-13(20 ng/ml)的培养基刺激24小时。之后同样加入待测化合物和阳性药,作用半小时,最后进行检测。 注意:IL-4和IL-13的配制需要先用灭菌水溶解,再用海藻糖稀释至所需浓度。 现在,你可以根据这些方法,轻松检测M1和M2型巨噬细胞对化合物的摄取情况了!
如何从小鼠中提取骨髓巨噬细胞BMDM :8-14周大的小鼠都可以用来提取BMDM。一只小鼠的BMDM可以铺满一个10厘米的培养皿。如果你想要获得尽可能多的BMDM,可以考虑提取两只小鼠的前腿骨髓。 ꠦꤥ悤𘋯小鼠处理:首先,用足量的75%乙醇对小鼠进行喷洒消毒,或者将其浸泡消毒。 剪断腿部:用手术刀沿着小鼠大腿根部的髋关节处将整条腿拆下,注意不要切断腿骨。切断跟腱,切除胫骨周围的主要肌肉。用剪刀贴着股骨方向,切除股骨周围的主要肌肉。切除膝关节软组织,以获得股骨。切断腓骨及其周围肌肉,以暴露完整的胫骨。 冲洗骨髓:将骨髓冲洗到细胞培养皿中,配好的DMEM(细胞培养处理,直径10厘米),每根骨头缓慢注射约2-3毫升DMEM,直至骨髓腔变白。确保DMEM不回流,以避免污染。培养基为DMEM+10%FBS+1%双抗+100 ng/mL M-CSF。 ꠦ取骨髓巨噬细胞BMDM需要一定的技巧和耐心,但通过以上步骤,你可以成功获得大量的BMDM细胞,用于科研实验。
解决P65磷酸化无条带难题! 你是否在WB实验中遇到了P65磷酸化无条带的困扰?别担心,这里有一些实用的血泪经验分享给你! 짻胞模型选择很重要 RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞是常用的炎症细胞模型,与NF和炎症密切相关。此外,BMM/BMDM、THP-1等人单核细胞白血病细胞也是不错的选择。 合适的刺激物是关键 LPS(脂多糖)是激活NF信号通路的有效刺激物,其次是TNFIL-1퉧性因子。这些刺激物能诱导巨噬细胞分化,进而激活P65磷酸化。 ᥢ加M1阳性对照 为了确保刺激方式合适,可以增加一个M1促炎巨噬细胞阳性对照。这样,当结果出现异常时,可以迅速排查问题所在。 LPS刺激条件参考 实验室常用的LPS浓度和刺激时间多种多样,但可以通过查阅文献来找到适合自己实验条件的最佳参数。 验细节不容忽视 在制样过程中,务必添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,并全程低温操作以保持磷酸化的稳定性。此外,封闭液和一抗稀释液的选择也至关重要。 希望这些经验能助你顺利解决P65磷酸化无条带的问题!
巨噬细胞M1/M2极化实验详解 巨噬细胞是一类重要的免疫细胞,主要存在于外周血和炎症组织中。它们属于单核细胞类群,通过吞噬细菌、死亡细胞或细胞残片参与非特异性免疫调节。巨噬细胞将信号传递给其他淋巴细胞及其他免疫细胞,参与特异性免疫调节。 巨噬细胞通常以单核细胞前体的形式进入血液中,当单核细胞浸润到组织中时,会分化成巨噬细胞。巨噬细胞主要存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝脏以及脾脏等组织中。根据功能以及炎症分泌水平,巨噬细胞分为M1型和M2型两种亚群。 M1巨噬细胞主要由LPS(脂多糖)及IFN𐧴 🀦泌IFN-𐧴 TNF-🧘䥝死因子퉤🃧症因子;M2巨噬细胞主要由IL4(白细胞介素4)、IL13(白细胞介素13)、M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)等激活,主要分泌IL10(白细胞介素10)等抗炎症因子。 巨噬细胞的鉴定通常采用流式细胞术或免疫荧光实验,通过检测一些巨噬细胞标志物来进行。常见的人和小鼠M1巨噬细胞标志物有CD68、CD80、CD86、CD32等;常见人和小鼠M2巨噬细胞标志物有CD206、CD204、CD163等。 这两种亚群的作用包括:①作为抗原提呈细胞;②杀伤肿瘤效应细胞;③通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞;④处理和呈递肿瘤抗原,激活T细胞以产生特异性抗肿瘤细胞免疫应答;⑤通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞;⑥分泌肿瘤坏死因子(TNF)等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。 在基础科学实验中,常用的巨噬细胞模型包括小鼠RAW264.7巨噬细胞、人THP1单核细胞、小鼠BMDM骨髓细胞等。动物实验研究巨噬细胞的造模更多是偏向于炎症模型,例如急性肺损伤模型。 以下是几种常见的巨噬细胞诱导方法: THP-1(人单核细胞) THP-1是来自急性单核细胞白血病患者血液分离而来,在基础科研实验中,常常诱导分化为巨噬细胞来进行机制研究。THP-1通常受PMA(佛波酯)150nmol/L诱导24h即可分化为巨噬细胞,然后在PMA持续存在的情况下,LPS(100ng/ml)、IFN0ng/ml)诱导48h,产生M1巨噬细胞;IL4(20ng/ml)、IL13(20ng/ml)诱导48h,产生M2巨噬细胞。 RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞) RAW264.7细胞是主要炎症模型、巨噬细胞极化等体外研究细胞,广泛用于急性肺损伤、风湿性关节炎等模型中。LPS(200ng/ml),12h可以诱导此细胞向M1分化,产生炎症因子,10ng/ml IL-4诱导RAW264.7细胞12h可以产生M2细胞。 通过这些方法,可以更好地研究巨噬细胞的极化过程和功能。
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