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OD600前沿信息_od600值与细菌浓度的关系(2024年11月实时热点)

内容来源：兔子在线电影所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

OD600

植物遗传转化：从零开始到成功的指南 𐟌Ÿ 前期准备构建表达载体 𐟛 ️ 设计引物：根据需求设计引物，利用PCR扩增基因全长或CDS。质粒提取及同源重组：提取空载体质粒，进行酶切连接，然后转入大肠杆菌进行测序。农杆菌转化：将测序正确的菌液扩繁、保菌后提质粒，转入农杆菌。建立再生体系 𐟌𑊩€š过文献查阅或正交试验建立相应外植体的再生体系。如果不需要组织培养，此步可忽略。 𐟌Ÿ 转基因操作准备农杆菌液：取过夜摇好的农杆菌液50ml，室温5000rpm离心10min收集菌落。重悬菌体：加入重悬液（如MS液）将菌体OD600稀释至0.5，将外植体浸没于重悬后的菌液5min。培养外植体：将外植体转入培养皿中，用锡箔纸包好避光室温下培养72h。再生培养：72h后将外植体转入正常光照条件进一步进行再生培养，直至获得完整植株。 𐟌Ÿ 阳性苗的获得阳性苗筛选 𐟔 在抗性板上筛选阳性苗，如果有GFP或Cherry等荧光基因，可以使用荧光观察法。阳性苗鉴定 𐟔슥𐆩˜𓦀程—进行PCR鉴定和提取RNA反转录后进行qRT-PCR进行鉴定。

𐟌𑨽쥟𚥛 植物实验全攻略𐟧슰ŸŒŸ前期准备𐟌Ÿ 1️⃣ 构建表达载体： - 引物设计：利用PCR扩增基因全长或CDS。 - 质粒提取及重组：将空载体摇菌、酶切连接后转入大肠杆菌测序。 - 农杆菌转化：将测序正确的质粒转入农杆菌。 2️⃣ 建立再生体系： - 通过文献或正交试验，为外植体建立合适的再生体系。 𐟒娽쥟𚥛 操作𐟒劭取50ml农杆菌液，离心收集菌落。 - 用MS液等重悬液将菌体OD600稀释至0.5。 - 将外植体浸入重悬后的菌液5分钟。 - 将外植体转入培养皿，避光培养72小时。 - 72小时后，将外植体置于正常光照下，直至获得完整植株。 𐟔婘𓦀程—筛选与鉴定𐟔劭在抗性板上筛选阳性苗，或使用荧光观察法（如GFP或Cherry荧光基因）。 - 通过PCR和qRT-PCR对阳性苗进行鉴定。

大肠杆菌感受态细胞的制备指南 𐟌€ 𐟌Š 互联网的记忆总是那么强大，所以我决定写下这份实验指南，方便以后查阅。 𐟧Š 实验前准备：提前一天配制0.1 mol/L的CaCl2溶液，并进行灭菌处理，然后放入冰箱预冷。将大肠杆菌摇至OD600值小于0.5（我一般摇到0.35~0.45左右）。 𐟔젥ꌦ�꤯𜚊将无菌的1.5ml离心管插入碎冰中预冷10分钟（一般做10管预冷10分钟），然后将菌液分装到各个离心管中。分装完后，继续插入冰中放置10分钟，然后4℃、5000g离心10分钟。用枪小心吸净上清液（也可以倒置倒尽上清液），然后加入1ml冰冷的0.1 mol/L CaCl2溶液，用枪小心吹匀（不要吹出泡沫），插入冰中放置30分钟（等待期间可以将CaCl2重新放回冰箱，保持冰冷状态）。 4℃、5000g离心10分钟，弃上清后用200ul冰冷的0.1 mol/L CaCl2溶液重悬，再次插入冰中放置30分钟（操作同上一步）。 4℃、5000g离心10分钟，弃上清后用200ul冰冷的0.1 mol/L CaCl2溶液重悬，按每管100ul分装到0.5ml离心管中（离心管提前做好标记，也可以预冷一下），放入-70℃冰箱保存。 𐟓ˆ 共制得20管感受态细胞。

𐟧쩅𕦯双杂交实验全攻略𐟔슰ŸŒŸ实验准备𐟌Ÿ 1️⃣ 酵母菌株的保存与验证： - 用接种环从-70Ⰳ冻存的酵母Y190中划取菌株至YPD琼脂培养平板。 - 在30Ⰳ培养3-5天，直至菌落直径达2mm。 - 挑选3-4个粉红色菌落进行表达型验证。 2️⃣ 酵母感受态细胞的制备： - 挑选直径2-3mm的酵母单菌落，振荡分散后转入YPDA液体培养基。 - 培养至稳定期后，调整OD600至0.4-0.6。 - 离心收集菌体，用1xTE/LiAc溶液重悬。 𐟒奮ž验过程𐟒劊3️⃣ 酵母感受态细胞的转化： - 制备PEG/LiAc溶液。 - 将BD载体与AD载体混合，加入酵母感受态细胞。 - 加入PEG/LiAc溶液，30Ⰳ培养30min。 - 加入DMSO至10%终浓度，42Ⰳ热休克15min。 - 冰浴后离心重悬细胞。 4️⃣ 共转化产物的培养与处理： - 将共转化的酵母细胞铺于SD/-Trp/-Leu/-His+3-AT培养平板。 - 30Ⰳ倒置培养7-10天，选择直径>2mm的淡粉色菌落。 - 用牙签重新点种在新鲜培养平板上。 𐟎‰实验完成𐟎‰ 通过以上步骤，你成功完成了酵母双杂交实验！快去探索你的蛋白质相互作用吧！𐟚€

酵母双杂筛库实验：感受态制备与转化全攻略 𐟌𑠩…𕦯感受态制备步骤：将AH109酿酒酵母在三个板上划线，并在30Ⰳ下培养。挑选长势良好的单菌落，放入3mL YPDA液体培养基中，继续在30Ⰳ下过夜培养。第二天，将菌液转移到50mL YPDA液体培养基中，培养至OD600值为0.5~0.6。用30mL ddH2O重悬菌液，5000rpm离心5分钟，去除上清液。用1.5mL 1.1㗔E/LiAc重悬菌液，5000rpm离心30秒，去除上清液。最后，用600 1.1㗔E/LiAc重悬菌液，分装成100每支。 𐟔„ 转化步骤：取一支分装好的感受态，依次加入质粒BD:0.1和AD:0.2。用carrier DNA（95Ⰳ~100Ⰳ，5分钟，快速冰浴，重复一次）和500 PEG/LiAc混合均匀，30Ⰳ水浴30分钟，每10分钟晃动一次。加入20 DMSO，混合均匀，42Ⰳ水浴30分钟，每10分钟晃动一次（小转可不加）。 12000㗧离心20秒，去除上清液，用1mL YPDAPlus(2㗙PDA)重悬（小转可不做）。在30Ⰳ摇床以200rpm培养30分钟。 12000㗧离心20秒，去除上清液。用100mL 0.9% NaCl重悬，涂板。 𐟓‹ 筛库实验所需质粒： X:BD（X为诱饵蛋白），用于筛库与毒性验证。 X:BD+AD、阳性对照、阴性对照，用于自激活检测。 BD，用于毒性验证。通过以上步骤，你可以成功制备酵母感受态并进行转化，为筛库实验做好准备。

𐟔젃CK8细胞增殖曲线绘制指南 CCK8实验是细胞增殖研究中非常重要的一部分，其原理如下： 𐟔 原理： WST-8（四唑盐）是CCK-8的主要成分，呈粉色。在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下，被线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲臜类染料（Formazan），并释放到细胞外溶解在培养基中。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。通过酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可以间接反映活细胞数量。 ⚠️ 注意事项： 1⃣️ 细胞消化要充分，铺板时要均匀，不能过密，一般每孔3000个细胞，不同细胞类型可能需要调整。 2⃣️ CCK8孵育时间为1-4小时，具体时间可以通过预实验确定最佳反应时间。 3⃣️ CCK8最好稀释成10%（用完全培养基稀释）后加入细胞中。 4⃣️ 建议使用双波长检测，检测波长为450nm，参比波长为600nm。参比波长可以过滤掉因液体浑浊或孔板底部不干净带来的测量误差（OD450-OD600即可）。 5⃣️ 每天定点测量，孵育CCK8的时间要保持一致。 6⃣️ 96孔板不易污染，可以直接用于测定。测完后尽快盖上盖子放回原处。如果酶标仪距离培养室较远，可以将上清液吸到新的96孔板中进行测定。通过以上步骤，可以绘制出准确的细胞增殖曲线，为细胞研究提供有力支持。

𐟧쨴觲’转化操作全攻略𐟒‰ 𐟔쥮ž验步骤大揭秘： 1️⃣ 将感受态细胞放置在冰盒上解冻，同时准备好质粒和EP管。 2️⃣ 解冻后，取50感受态细胞加入EP管，再加入0.5-1质粒，冰浴30分钟。 3️⃣ 水浴锅42℃热激60秒，继续冰浴5分钟。 4️⃣ 在超净台内加入500无抗性LB液体培养基，摇床37℃、180rpm孵育15-30分钟。 5️⃣ 离心后去上清，剩余部分轻轻混匀。 6️⃣ 涂板，标记好平板后，取10-20液体涂板，倒置37℃培养过夜。 7️⃣ 第二天观察菌落，合格后封存于4℃。 8️⃣ 挑取单克隆菌落，放入氨苄抗性LB液体培养基中，摇床培养过夜。 9️⃣ 使用试剂盒抽质粒，根据说明书操作。 𐟌Ÿ经验分享时刻： - 感受态细胞-80℃保存，转化前冰上融化。 - 摇床孵育时间根据质粒情况调整。 - 培养基抗生素选择需仔细阅读说明书。 - 涂板量可自行调整，普通质粒可取30涂6cm平板。 - 培养时间一般过夜即可，菌落大小适中时挑菌。 - 提质粒前测OD600值估算细菌浓度。 - 转化前务必阅读质粒说明书，选择合适感受态细胞。 𐟒ᥰ贴士：实验过程中注意无菌操作，确保实验结果准确可靠哦！

𐟥”马铃薯转基因全攻略：从入门到精通！植物基因工程技术的一个关键应用是将外源基因导入马铃薯中，以改良其遗传特性，提升产量和品质。农杆菌介导法是其中最常用的方法，具有操作简便、效率高、成本低等优点。以下是马铃薯转基因的详细步骤： 𐟌𑠩℥Ÿ𙥅𛊩€‰择生长状态良好的Desiree（底西瑞）脱毒组培苗，切取1cm左右的茎段，放置在MS培养基上，于25℃-28℃光照培养箱预培养3天，使其成为“转化感受态”。 𐟌🠥†œ杆菌侵染与共培养预培养的第二天，将携带目的基因的农杆菌LBA4404或AGL1在含有加利福平的固体培养基中划线，28℃倒置培养2天。用无菌水将农杆菌菌体重悬，调整菌液OD600=0.3~0.5，将预培养后的茎段置于菌液中侵染20分钟。侵染结束后将茎段置于滤纸上晾干，转移至MS1固体培养基中，于黑暗中共培养2天。 𐟌𑠨ﱥＦ„ˆ伤组织在100 mL锥形瓶中加入40 mL含有特美汀的无菌水，将茎段转移至锥形瓶中120 rpm振荡清洗5分钟，重复清洗4-6次，将茎段表面的农杆菌清洗干净。然后将茎段在滤纸上晾干，转移至含有特美汀的MS2诱导培养基培养10天，诱导茎段产生愈伤组织。 𐟌🠨ﱥＤ𘍥Š𝊥𐆤𚧧”Ÿ的愈伤组织转移至含有潮霉素（转化载体的筛选标记为潮霉素）和特美汀的MS3分化培养基上，每隔10天转接一次新培养基，直至诱导再生出具有抗性的不定芽。 𐟌𑠥†生与鉴定剪取具有抗性的不定芽转移至MS生根培养基中，诱导其再生出完整植株。取部分组织通过PCR、Southern blot、qPCR等方法对再生植株进行分子鉴定，确认目的基因已成功整合到马铃薯基因组中。 ⚠️ 注意事项基因型依赖性：马铃薯遗传转化效率受基因型影响较大，不同品种之间可能存在显著差异。操作细节：在遗传转化过程中，需要注意操作细节，如侵染液的浓度、共培养条件等这些都会影响转化效率；激素的种类和比例则会影响诱导再生效率；其次转化过程极易发生污染问题导致转化失败。

𐟒匡b惊险瞬间：血压飙升集锦𐟒⊰Ÿ”쥜襮ž验室的紧张氛围中，血压飙升的瞬间总是让人心跳加速。记得那次，熊三正在忙碌地使用BSC，我急切地需要使用它来测量cell的OD600。𐟘㊊𐟤즈‘请求他让我先用，他虽然答应了，但很快就做完了。就在我准备使用时，他竟然把沾满细菌的transformation stick等物品直接扔在BSC桌上，然后起身表示他已经用完了。𐟘ኊ𐟘𑦈‘简直惊呆了，这不是心情不好发脾气，而是他的实验室技能太差了，不知道这样乱扔会导致cross contamination。我竭力抑制住内心的愤怒和惊吓，继续我的实验。𐟘“ 𐟘𕤸€年半的时间里，我见证了熊三的许多离谱操作，比如用完BSC后不关灯、不关通风，甚至有时候开着玻璃门就回家了。那个无菌超净台被他弄得像个养蛊台一样。𐟤梀♀️ 𐟤”我常常看着他肥大的背影想，就这样的人，怎么就能是post-doc呢？实验室的血压飙升瞬间，总是让人哭笑不得，也让人深思。𐟘”

𐟔‹电转感受态制备全攻略✨ 𐟌ˆ想要现用现做Ecoli电感受态吗？这里有个超高效制备方法哦！𐟒ኊ𐟓Œ首先，准备好以下材料：预冷备用10%甘油、4℃离心机、划线涂布分离菌株单克隆、LB培养基、SuperBroth无抗液体培养基等。 𐟓Œ步骤来啦： 1️⃣ 新鲜过夜LB培养饱和菌1%转接至SuperBroth无抗液体培养基，37Ⰳ摇菌至OD600~0.40-0.45。 2️⃣ 菌液冰水浴10分钟，然后4℃4000rpm离心15分钟，小心倒弃上清。 3️⃣ 加100ml预冷10%甘油重悬菌体，倒入2x50mL离心管，颠倒混匀。4℃3000g离心10分钟，倒弃上清。 4️⃣ 重复步骤3，加入500uL预冷10%甘油，重悬至1000-1200uL，测量OD600应当介于0.25-0.4之间哦！ 𐟎‰完成啦！现在你可以使用电转感受态进行后续实验啦！记得在1-2个月内使用哦，否则效率可能会下降呢！✨

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